Preparo de esporo seco, para viagem, à partir de cultivo em ágar/gel

Como preparar esporos secos e viáveis para cultivo, à partir das hifas brancas , ou cultura células globulares de cogumelos, ou dos compostos de pinagem de cogumelos, ou da tora de madeira de cultivo de cogumelos.

Material para preparar:
-Recortes de papel absorvente(papel toalha ou papel filtro), em quadradinhos ou retângulos de + ou – 0,5 cm x 0,5 cm, se for de papel higiênico ou lenço de papel, faça tiras um pouco maior e vá dobrando até formar um quadradinho.
-Recorte de papel sulfite (ou papel crepe-pardo), 6 cm x 8 cm)

Modo de preparo:
Dobre o 2 º(papel de 6 x 8 cm) ao meio do comprimento, e coloque o 1º(papel absorvente 0,5 x 0,5 cm ) no meio. Faça dobras nas laterais, fechando aberturas, 1 ou 2 vezes, para fazer um envelopinho que será levado para esterilização.

Faça vários destes envelopinhos, junte tudo e faça um pacote, enrolando tudo num só pacote, em papel Kraft(pardo).
Leve-o para esterilizar em autoclave ou panela de pressão(15min chiando é suficiente,e não 30 min. Como em materiais hospitalares), (porque aqui não tem contato com sangue com possibilidades do vírus da hepatite B, que é bem resistente ao calor).

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Recorte pequenos de papel higiênico, papel toalha ou papel filtro.

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Coloque dentro de envelopinhos de papel, feito com recortes de papel sulfite ou papel kraft(pardo).

Pode ser folha de alumínio.

E leve para esterilização.

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Observação:
No micro-ondas, este não dá. Porque não tem como humidificar, sem encharcar e sem contaminar, e dar pressão de 2 atmosferas, com temperatura de 120 ºC.
E à seco, incendeia o papel, ou fica todo torrado e preto. Micro-ondas é para pasteurização e precisa, ficar aquecendo de 80 ºC à 100ºC por uma hora inteira ou mais, dependendo do volume.
Só em vidros ou (plásticos que agüentem 145ºC = polipropileno) e com conteúdo líquido dentro.
Teria que se fazer, testes se está funcionado pasteurização.



Após ter esterilizado, manipule tudo com técnica asséptica (bancada ou capela de vidro com chama acesa,de bico de Bunzen ou lamparina de querosene, etc, ...
Pegando uma amostra de cultivo de esporos (hifas/micélio ou colônias de células globulares) de frasco, tubo, Placa de petry, etc...
Deixe desdobrado as rebarbas do envelopinho, mas não abra ainda. Deixe perto da lamparina acesa, para evitar conaminação.

Flambe de leve um arame inoculador (espere esfriar, com ela na mão----uns 20 segundos), pegue um pouco dos esporos( em hifa ou colônia de globulares) com a ponta do arame flambado, e abra o envelopinho esterilizado, e inocule no papelotinho absorvente. E feche o envelopinho, imediatamente, o quanto antes, para evitar cair algum pó com contaminante.
Se ficar mancha de fuligem no papelotinho absorvente não faz mal.
Escreva nome do cogumelo e data da inoculação, por fora, pode ser à caneta esferográfica comum.
Ponha num recipiente como pote de vidro ou plástico p/ sobremesa ou copo pequeno(aberto) e leve para um lugar bem seco, e à sombra(sem sol direto), para secar devagar, e muito bem.
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As células somáticas esporulam, se desidratam e entram em hibernação. Hifas em si, morrem, mas na ponta de cada uma das hifas (pelinho) nascem sempre um ou dois esporos soltos, de célula somática e não gameta. (célula globular somática, com potência para se esporular). Olhando um “esporo verdadeiro” de célula somática, no microscópio, ele parece uma célula muito menor, que normal, por não ter quase nada de água no seu citoplasma.
Um esporo que sai das lamelas, dos carimbos, são células gametas. Têm só metade dos cromossomos. Tem masculinos e femeninos no mesmo cogumelo, mas o objetivo deles é voar no vento, encontrar outro esporo gameta e formar um novo embrião (início de novas células-filhos e não clones). Se unir gametas do mesmo cogumelo, para servir de pai e mãe ao mesmo tempo, é quase como clonagem, mas eles vivem normal, mesmo assim, sem problemas.
Um esporo de célula-gameta, dos carimbos é ainda menor (metade do tamanho de um esporo de uma célula somática).

Tem algumas espécies de cogumelos que se bi-esporulam. Ou seja, tem duas células desidratadas, dentro de uma mesma membrana celular. E seu tamanho, então, é duas vezes maior que esporo somático, em geral. Isso quer dizer também 4 vezes maior que um esporo-gameta.
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Se for secar em cima de um lugar levemente aquecida como estufa, ou atrás da geladeira das antigas, seria bom. Deixe secando por 24 à 48 horas, e depois é só colocar em saquinhos de plástico individual, como saquinho para talheres de restaurantes, é suficiente. Assim, pode juntar vários amostras, de vários tipos de cogumelos, enrolar tudo num único pacote de jornal velho(2 folhas bem secas), depois num saco plástico grande(3 L), e fechar bem torcendo as sobras do saco e dando nó depois.
E assim, pode guardar na geladeira por 1 ano (alguns vivem assim por 5 anos) mas prefiro validar para 6 meses, só por garantia.
Tem que ser no último andar de estrados, de baixo, da geladeira, e bem no fundo.

Desse modo, posso manter um banco permanente de esporos, além do “carimbo”.
E com para carimbo, teria que ter cogumelos adultos e bem frescos, com mínimo de contaminação possível.
Essa técnica, de envelopinhos de papel é bem mais segura contra contaminação, e mais fácil de obter amostras para inoculação.
E também, pode-se obter dezenas de envelopinhos inoculados, de um só frasco de cultura, e bem rápido.

O envelopinho pode até ser de folha de alumínio, mas o processo de secá-lo leva mais tempo.


Como extrair esporo de cogumelo da tora de madeira:
Se não tiver cultivos em gel, até pode tirar hifas de onde estão nascendo cogumelos (composto ou fundo da madeira).
É só remover a parte externa da madeira, após ter flambado tora de leve com um maçarico ou fogareirinho de gás (liquinho), e raspando com um canivete, pré-flambado também.
Removendo cerca 1cm de espessura, do local de onde será coletado esporo(hifas-intra madeira), + ou – uma área de 6 a 8 cm de diâmetro é suficiente.
Após essa limpeza, flambe novamente tanto canivete, quanto tora, levemente (máximo 3 segundos) e raspe mais um pouco e jogue fora. Agora próximas lasquinhas, recolha bem pouco para envelopinho, ou direto para Placas de Petry, com gel/substrato de cultivo esterilizado, previamente.
Assim estará clonando este cogumelo.

Como extrair do composto(bolo de substrato orgânico moído):
Do composto em bolo, também é parecido, remover esporos, só um pouco mais fácil.
Entre raspar madeira e raspar composto, qual exige mais esforço físico?
Escolha o bolo mais branco e uniforme possível.
No bolo- composto de onde estão nascendo cogumelos, pegue uma colher prévimente flambada e remova cerca de 1 a 2cm de espessura da parte superior, onde parece, mais branco cheio de hifas(micélio).
Se tiver pins novos nascendo, não precisa, mexer perto delas.
Vire o composto de cabeça para baixo e veja se ele não se desmancha. Se desmanchar, pegue outro mais firme. Flambe de leve em chama, de fogareirinho de liquinho, ou passe maçarico de gás, por cima, de leve, só no canto que vai mexer. Não flambe os pins, nem perto delas.
Flambe também uma colher ou canivete, e raspe mais um pouco, depois com pedacinhos dessas raspas, inocule cultura em gel,ou envelopinho com papelotinhos.
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Seria bom fazer todo esse procedimentro, dentro de uma sala sem corrente de ar, sem ventilador ou dentro de uma capela de vidro, para manipulação biológica, onde entra só as mãos para dentro, e os objetos de que vai manipular.
No período que está desocupado, manteria uma lâmpada de “LUZ-NEGRA”(=ultra violeta, para esterilizar o ar e superfície interna. Enquanto ela estiver ligada, tem que manter um cobertor(pode ser de pano de brim cor escura), cobrindo a capelinha.
Ponde ser também aquela “manta=refletora”, que se usa em construção de casas.(Aquela que é colocando antes das telhas, como isolante térmico e anti-goteiras).
Remover cobertor e desligar a lâmpada de Luz-negra, quando quiser dar trabalhos nela (capela de vidro).
Deixar ligado 2 ou 3 horas, antes de começar a manipular, matérias biológicos, evita contaminação nos meios de cultura.
É claro que não deve deixar de lado, todas as outras precauções de manuseio biológico, contra contaminações dos meios (gel/ágar) para culturas.
Enquanto a luz negra estiver ligada, use óculos escuro para olhar, ou desligue quanto antes. Não deixe crianças, ficar olhando para luz-negra, à menos de 2 ou3 metros de distância, que vai acabar ficando com catarata antes da idade, ou ter envelhecimento precoce da retina do olho( células do fundo do olho).


Com este método de guardar esporos, é bem prático para enviar pelo Correios, dentro de uma carta normal e não precisa ser SEDEX.
Pode agüentar perfeitamente, temperatura ambiente por algumas semanas, sem perder vitalidade, de se vegetar novamente, quando papelotinho ser inserido diretamente, sobre um gel/ágar para cultura de esporos de cogumelos. Não precisa raspar nada, para semear gel.
Só precisa uma pinça anatômica, de ponta fina, sem dente.
Flambar a ponta, dessa pinça, esperar segurando na mão uns 30 segundos para esfriar, e pegar papelotinho, e colocar no gel/ágar para cultivar na incubadora, entre 31ºC à 38ºC.

Detalhes:
Se o gel de cultura contiver mais açúcar/glicose, em vez de hifas irão tender a formar mais colônias de células globulares, porque eles se acomodam.
As hifas são uma medida de sobrevivência, desses seres, onde eles ou tentam buscar por comida, mais longe, de onde está, ou tentam dar mais filhos ao mundo, como sobrevivência da espécie, frutificando e maturando gametas para lançá-los ao vento, para que seus filhos possam buscar paradas e oportunidades de sobreviver, fora do local onde atual (os pais) estão. E dizem que, porque um único cogumelo pode dar gametas machos e fêmeas ao mesmo tempo. E porque não têm diferenças sexuais verdadeiras, como nos animais superiores. Onde o sexo seria determinado por diferenças cromossômicas, exatas

Resultado de cultura, guardada em evelopinho com papelote seco, em geladeira (porta) por 4 meses.

Esse da foto é de um esporo do gênero pleurotus. E creceu células em formato globuloso(placas pardo leitoso) (= células soltas uma da outra e não em hifas). Neste formato é mais fácil de diluir em água para inocular com seringas, depois.

Se quizer que cresça em hifas é só reduzir(ou não colocar) glicídios(açúcares: glucose, dextrose, melaço,....) quando preparar ágar/gel.

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Envelopinhos guardado dentro de pote fechado com sachê de desecante (sais de cálcio ou potássio), para manter bem seco, os esporos e prolongar vida útil.

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Este sachê de desecante veio junto em pacote de alga comestível para sushi (nori---= produto japonesa) e estou reaproveitando.

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Guardar os envelopinhos, pós esterelizados, também em local seco, antes de inocular.

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Inoculando papelote.

Com ponta de um arame flambado, pegue uma pequena quantidade de hifas, ou megulhe na gosma(placa leitosa parda) de esporos de cogumelo e encoste no papelote e feche imediatamente, para não cair pó de contaminação, invisível.

Leve o papelote para secar, em cima de local aquecido como em cima da incubadora, por 24 horas.

Guarde depois em pote bem fechado, com sachê de dessecante químico.

Cogumelos & Cia(10)---Cyptotrama aspratum(A-24)

Chanterellus sp(A-24),







(A-25) e (A-28) ---amarelinhas (bifurcadas) do bambú

Chanterellus cibarius(mini)?

Conclusão=Cyptotrama aspratum

Encontrada em Outubro de 2008 em um pedaço de madeira de bambú caído (numa taquareira).

Ivoti-RS-Brasil.

Fragrado, algumas larvas de mosca drosófila(mosquinhas-dos-frutos-passados) se alimentando-se dela.

Precisa mais testes para ver sua comestibildade, mas probabilidade dela ser comestível, são bem altas.

Flambado de leve e prestes a ser picotado, para cultivo de seu tecido.

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Antes da flambagem, em cima de um lenço de papel.

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Idem (mais zoom).

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Na madeira de bambú.

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Idem (fora de foco).

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Pedaço de tecido em cultivo.

crescendo micélios, mas algumas larvas de drosófila nasceram cresceram um pouco, mas morreram depois por falta de oxigênio alí. Provávelmente, já tinha ovos postos nela, no campo, e não vi.

Frasco estava bem fechada com plásticos.

Foco não ficou boa.

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Nos frascos das laterais, micélios do A-24.

No meio, um frasco virgem, sem inoculante, para mostrar diferença de cor do gel, que fica durante cultivo.

Frasco da esquerda, micélios puros, mas um pouco envelhecidas (10 semanas = 1º na incubadora e restante em temperatura ambiente) = este está sem contaminante.

Frasco da direita, quase o mesmo tempo de envelhecimento, mas com contaminante que o escuresceu mais.

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Mesma foto do de cima, com mais zoom.

Note que o gel permanece, com um pouco de coloração avermelhada do corante alimentício.

Demonstra que esta espécie, quase não libera ácidos durante seu crescimento.

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Este é re-cultura da amostra(de hifas) pego do frasco, acima.

O gel desta cultura foi açucarada, então, cresce esporos em glóbulos em vez de hifas.

Note "placa de gosma parda clara" na superfície do gel.

E a coloração que ficou o gel. O vermelho do corante alimentício se desfez completamente.

Significa que atividade celular em glóbulos é muito maior que atividade em hifas, quanto à liberação de ácidos e consumo de compostos glicosados.

Quem quizer esporos deste para fazer testes científicos, estarei à disposição em seder amostras de cultivo (gratuíto).

Cogumelos & Cia(9)---Shimeji-cinza

Shimeji-cinza (Pleurotus ostreatus)

=shimeji-negro

=shimeji-preto

=Shimeji-marrom-cinza,...

Esta primeira foto não é minha. É meramente ilustrativa.

Conforme cepas(ou clonagens) desta variedade os tons cores variam de mais claras, às mais escuras.














































Esta é uma cultura de tecido do Shimeji-cinza, com 24 horas de incubação.


E já emitiu muitas hifas brancas em sua volta.





O cogumelo inatura é levemente flambada ao fogo e picotado em pedacinho de 0,5 cm, com bisturi e pinça flambada em cima de um pirex ou tampa metálica de quentinha, flambada ao fogo ou esterilizada.



Data da cultura 14-07-2008.































































































Esta é a mesma foto do acima, editado com mais zoom e recorte de imagem.






















































































Hifas da 1ª cultura, inoculada nesta Placa de petry.


Cresceu maravilhosamente bem.
Aqui está com 5 semanas (1º semana ficou na incubadora e já tinha ocupado todo ágar, restante das 4 semanas ficou em temperatura ambiente). Enrolado, por cima, com filme de PVC (de cozinha) para evitar resecamento.


Mais 4 meses deixei assim, em temperatura ambiente, dentro de uma caixa de papelão, junto com outros frascos de cultura, mas este resecou, completamente.


Vou re-semear esta amostra resecada e ver se reaparecem, com esporulação desidratada.





Mais tarde saberão destas notícias, porque ainda não re-transplantei.


















































Este composto com Shimeji-cinza está com 10 semanas, em temperatura ambiente.


Estava enrolado em mais 3 sacos plásticos brancos, e amontoado dentro de caixa de papelão.


Micélios estão bem distribuídas e bem brancas.


























































































Este composto com Shimeji-cinza está com 22 semanas, em temperatura ambiente, mesmas condições, que da foto acima.


Micélios estão bem distribuídas, mas amarelando ou amarronzando bastante. Mostrando sinais de envelhecimento.




























































































































































No dia 08-01-09, coloquei 3 sacos de compostos do Shimeji-cinza em uma bacia, após ter dado choque térmico na geladeira.

Dos 3, um ficou com este mofo cinza por cima do composto, isso em apenas 3 dias, apareceu e tomou conta de quase toda superfície, deste composto.

A parte branca são tufas enormes do micélio do Shimeji-cinza.

Como têm 3 sacos na mesma bacia, e as outras parecem ainda não estar afetado, vou separar esta, dos demais. Aproveitei que as hifas estão bonitas, aqui, coletei amostras em dois frascos de cultivo, para perpetuar hifas.

Este saco vai ser descartado, ou ser re-processada, misturada com novos compostos e fazer novos sacos de compostos esterilizados.

Cogumelos & Cia (8)---Hiratake-cinza

Hiratake-cinza ou marrom (Pleurotus ostreatus)

Esta primeira foto, não é minha.

É só ilustrativa.

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Pedacinho do cogumelo (Hiratake-cinza).
Incubação de 24 horas, já mostra saindo hifas do próprio tecido.
Note que não coloquei direto sobre o gel, para ter mais chances de sair hifas, do que de células globulosas(em placas leitoso pardas).
Na parede tem um pouco de nutrientes porque gel quando líquido, grudou um pouco lá, e por osmose e condensação, a água sobe até lá.

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Mesmo pedaço de tecido, no 4º dia(96 horas) de incubação.

O pedacinho de tecido, veio de um cogumelo inatura(fresco), vendida em bandejinhas, num supermercado metropolitano.
Para proceder: flambar um pedaço, de leve, e picotar em cima de um pirex estéril, com estilete ou bisturi e pinça estéril. Pegar um pedacinho de + ou - 0,5 cm, da lamela(chapéu) ou pode ser base do pé.
Este pedaço da foto é de uma lamela.

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Mesmo tecido, no 7 º dia de incubação. (Pouca diferença do anterior com 4 dias).
Parece que estão sentindo efeito da falta de nutrintes, lá em cima.

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2ª cultura (=2ª trasferência) de hifas, do hiratake-cinza.
Gel com menos açúcar e com corante vermelho.
Note que o gel, já deixou de ser vermelho e ficou parda.
Algumas hifas ficaram avermelhadas, como do hiratake-salmão, fica as vezes. Seria mutação? Não é reflexo vermelho da bancada de onde foi fotografada. Já estava vermelho, antes de colocá-la ali.
Este frasco está com 39 dias na incubadora.
Seria melhor re-semear mais alguns frascos novos com este, para garantir perpetuação. E guardar este frasco na geladeira, em vez de esquecê-la na incubadora.

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Hiratake-cinza no composto em saco plástico.
18 semanas em temperatura ambiente (=4 meses e meio).
Deixado fechado e enrolado em mais 3 sacos brancos ou pretos e amontoados dentro de caixas de papelão.
Já atingiu ponto, para dar choque térmico (24 horas na geladeira) e levar para começar sair os pins(frutificar).
É hora de abrir o saco por cima e levar em ambiente controlado para humidade e temperatura.
Por enquanto irei colocar dentro de uma bacia de plástico grande, e tampar com outra bacia do mesmo tamanho, por não ter infra estrutura.
Estou experimentando e é uma forma de aprendizagem.
Antes de cortar o saco por cima dou uma antissepsia geral em todo saco com solução de:( 20ml de ácool 92º e 1 ml de iodofour, em uma xicrinha). Embebo um pedaço de papel toalha de cozinha e passo na mão toda, na tesoura, e em toda superfície do saco plástico que está isolando os micélios, do ambiente. Passo o mesmo nas bacias em que irão repousar, daqui para diante.

As bacias prendo com fita adesiva em 3 pontos para ela não cair de cima, uma da outra.
Escrevo em outra tira de fita, a data em que foi posto e o nome do cogumelo.
Se couber dois sacos na bacia, tem que ser os dois do mesmo tipo e espécie do cogumelo(exatamente iguais).

Cogumelos & Cia (7)---Minhas aventuras com Shiitake (Lentinus edodes)

A primeira foto não é minha. É meramente ilustrativa.

Minhas aventuras com Shiitake (Lentinus edodes).

1º dia de incubação:

Nada cresceu ainda. O que está em volta do tecido (pedaço do cogumelo) é gordura de frango.

Mas 2 semans depois começou finalmente, crescer esporos globulares, em dois frascos, das 5 amostras cultivadas. De onde sairam próximas culturas.

Não foi tirado fotos, das seguintes datas que se percorreram.

Tecido de Shiitake é fresco, comprado em bandejinha, de um supermercado.

Um chapéu foi flambado de leve, picotado com técnica asséptica e plantado sobre um gel/ágar (=sem corante alimentício, por não sabia do segredo ainda, nessa época).

Receita deste gel:

-4 g de kantem em pó (ágar comestível),

-um copo(250ml) de caldo (galinha fervida em panela de pressão),

-amido de milho (um colher de sopa),

-açúcar de cozinha(1/2 colher de sopa),

-água de poço(250ml)

Mesma foto do acima, com mais zoom.

Shiitake em composto de spawn, para forçá-lo à emitir hifas, em vez de só células globulares.

Na parede surgiu hifas, onde tinha menos alimento.

No fundo, que ficou mais aguado e com bastante nutrientes, inclusive de açúcar de cozinha, pemaneceu crecendo só células globulares do Shiitake.

Pegando essa hifas brancas, se procede a inoculação em gel, menos rico em nutrientes, principalmente menos glicídios.

Receita deste spawn que ficou aguado demais:

-1 xícara de fibras(farelo de trigo),

-1 xícara de casca de bergamotas(frescos), ralado no liquidificador,

-2 colheres de sopa de farinha de trigo,

-1/2 colher de sopa de açúcar de cozinha.

-gelatina(comum) sem sabor 10g (pó 1 pacote ou 1 folha),

-1/4 de xpicara de caldo de frango (fervido 20min. na panela de pressão),

Problemas:

-excesso de glicídios, deixa os esporos acomodados e não forma hifas. Elas aperecem onde têm menos comida(açúcares como dextrose, glucose, frutose,etc...),

-excesso de água e gelatina comum, deixou o spawn muito líquido. Plano futuros: preparar spawn mais seco, sem gelatina, sem açúcar.

Muitos meses depois(4 meses) com vários transplantes, eis o resultado:

5º dia de incubação, 4ª série do processo de separação e isolamento contra contaminantes.

Finalmente hifas brancas puras do shiitake, após "cultura de tecido"=1º, depois só "esporo globular"=2º, e depois em spawn=3º, até obter amostra de hifas

Esporos globulares (sem hifas brancas ) do Shiitake.

Receita do gel:

-Caldo de batata inglesa = 500 ml,

-Açúcar de cozinha=1/2 colher de sopa,

-Kantem em pó incolor= 4 g (ágar comestível)

-5 gotas de corante vermelho (para confeiteiro) = para marcador/medidor de acidez durante crescimento,

Se quizer esporos em hifas, não colocar glicídios (açúcar, glucose, dextrose, melaço,....)

Cultura em vidro de Nescafé 250ml.

Para usar este, como inoculante basta colocar, no dia, 250 ml de água de poço ou mineral esterilizado e aspirar(sugar em seringas ou pipetas) para inocular em compostos de saco plástico ou toras de madeira.

Mesmo lote de gel de cultura, da receita acima.

Esporos do shiitake em forma globular(células globulares), gosma-leitoso-pardo(placas) crescem sobre o gel e paredes onde o gel estava grudado.

Leve escurescimento é normal nesta espécie de cogumelo.

Cada gota desta placa gosmenta têm bilhões de células do cogumelo.

Se esta cultura não for aberta, pode guardar na geladeira ( na porta ou plateleira de baixo e no fundo) por dois meses sem perder vitalidade dos esporos.

Neste formato de cultivo, facilita, dissolvê-los em água esterilizada e usar seringas ou pipetas, para inocular compostos em sacos plásticos (propileno e não vinil) esterilizados em panela de pressão (20 litros) ou autoclave. 15 min. chiando em fogo alto (fogareiro à gás de chão= boca hiper-grande , igual ao fogão industrial= de restaurantes).

Inoculando composto em saco plástico.

Antes de fincar agulha faça antissepsia com chumaço de algodão ou papel toalha embebido em álcool iodado 1%.

Note que o líquido da seringa chega a ser turvo de tantas células que está diluída, podendo ser mais clara (bem mais diluída se quizer).

Injeta-se 1 ou 2ml, que é suficiente em cada saco.

Depois de inoculado, feche o furinho com fita adesiva larga.

Cuidando para não tocar na parte da fita que vai em cima do furo. Corte um pouco mais comprido com tesoura e segure a fita, apenas pelas pontas, até colar lá.

Passe duas tiras em cruz para garantir vedação.

Nada impede de que se possa usar esta diluição também para inocular toras de madeiras, pingando lá para dentro algumas gotas com seinga ou pipeta, ou conta gotas (estéril). Só precisa furar com mandril mais fino e precisará menos cera para opercular(tampar furos), para evitar entrada de contaminantes na madeira.

Para quem não conhece estes são algumas pipetas em vidro, que pode ser esterilizado.

Tamanho conforme quantidade de líquido que quer gotejar, em algum lugar como dentro de tubo de ensaio, orifícios,....

Com pipeta bem fina pode-se furar com ela, compostos em sacos para inocular esporos em líquidos, se tem dificuldade de acesso à serigas, como em certos países.

Este é um conjunto de dois balonetes, feito em borracha e pode ser esterilizado em autoclave ou panela de pressão. Balão grande para sugar e pequeno para pingar.

É para conectar (opcional) na pipeta de vidro para facilitar sucção e gotejamento de líquidos. Sem precisar sugar com a boca.

Este é uma pipeta um pouco mais moderna, mais fácil de usar, em determinadas situções.

A ponteira é descartável e vem(ponteira) em tamanhos diferentes.

Nada impede, que no caso de cogumelos, você reaproveite as ponteiras (lavando e esterilizando em autoclave ou panela de pressão).

Todo o aparelho pode ser autoclavado (esterilizado em calor de vapor sob pressão).

Minha cultura de esporos de shiitake, esquecido no armário por 11 anos.

Vidro de 250 ml, que continha gel no fundo.

Tudo secou e contraiu-se, porque foi tampado com folhas de alumínio.

Re-semeado daquele esporos esquecidos por 11 anos.

10º dia de incubação e absolutamente nada cresceu. Nem um único invasor, em 5 amostras, semeadas.

Tudo morto!

Receita do gel é o mesmo da 1ª, deste post.

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Este composto de Shiitake ficou 22 semanas, fechado com mais 3 camadas de saco plásticos brancos.

Ficou amontoado dentro de caixa papelão, à temperatura ambiente.

Hoje(12-01-09) dei choque térmico (em geladeira, ficando 24 horas).

Desinfetei(com álcool iodado) o saco que vedava e cortei-o por cima (com tesoura flambada ao fogo). Coloquei em bacia plástica, desinfetada e cobri com outra bacia igual, para tampar e evitar entrada de contaminantes.

Prendi as duas bacias com com 3 tiras de fita crepe, em 3 pontos.

Agora é muitas expectativas. Será que vai frutificar?